观察麝香保心丸对老年动脉粥样硬化患者的影响论文
环氧化酶2 通过活化的巨噬细胞调节前列腺素的合成，与炎症和动脉粥样硬化的发生有关。本研究旨在观察麝香保心丸对老年亚临床动脉粥样硬化患者外周血单核细胞环氧化酶2 表达的影响，阐释麝香保心丸具有一定的抗炎作用，更有利于防治老年亚临床动脉粥样硬化患者发生心肌缺血而致心绞痛、胸闷及心肌梗死等。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选择我院2012 年3 月至2013 年2 月的34 例老年亚临床动脉粥样硬化患者，男性19 例，女性15 例，年龄67～79岁，平均(71±7)岁。纳入条件：经高分辨超声检测到颈动脉内膜中层厚度(IMT)增厚(IMT≥1.0 mm)，知情同意者。排除条件：动脉血管严重粥样硬化狭窄、严重肝、肾疾病、结缔组织疾病、肿瘤、感染、高热，近期服用抗生素、非甾体消炎药等患者。
1.2 方法
1.2.1 超声心动图检查：采用Sono5500 型彩色超声心动图仪，测量颈总动脉和椎动脉内中膜厚度IMT，IMT≥1.0 mm 即为IMT 增厚。
1.2.2 采血和细胞分离及培养：服用麝香保心丸前和30 d 后分别采入选老年亚临床动脉粥样硬化患者外周静脉血20 ml于无菌抗凝管中，用等倍稀释Hank′s 液，制成细胞悬液;把淋巴细胞分离液加到透明无菌的离心管中(体积为细胞悬液体积的一半)，再将细胞悬液缓慢地加在分离液上面;使用2 000 r/min 离心20 min，用毛细吸管吸取中间的乳白色层于另一无菌离心管中;用5 倍体积的Hank′s 液重复离心洗涤2次，用RPMI 1640 培养液离心洗涤1 次，每次离心速度为1 500r/min，离心10 min，将洗涤后的细胞沉渣加入1 ml 含10%胎牛血清的完全1640 培养液，进行细胞计数，并用2%锥虫蓝染色，计数活细胞，活细胞>95%;用RPMI 1640 培养液稀释，置于4 个细胞培养孔中，每孔细胞数调定为1×107 个，37℃、5%CO2孵育箱中培养6 h，去除上清液，得到贴壁的单核细胞;各孔加入RPMI 1640 培养液5 ml 和脂多糖5 μg(终浓度1 mg/L)，37 ℃、5%CO2孵育箱中培养24 h 后收集贴壁细胞。
1.2.3 单核细胞总RNA 提取和RT-PCR 扩增：购买TAKARA 公司RTPCR 试剂盒，环氧化酶引物由上海博亚生物技术有限公司合成。用Trizol 方法提取单核细胞总RNA，按RT-PCR 试剂盒说明书逐步进行操作，将RNA 反转录为cDNA 后，进行PCR 扩增(用来扩增基因片断)。上游引物，下游引物，扩增片断为342 bp。内参照Cyclophin 上游引物和下游引物，扩增片段206 bp。用94 ℃预变性3 min 后，再94 ℃变性50 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共38 个循环，72℃延伸10 min。PCR 产物采用1.5% 琼脂糖凝胶电泳，在扫描分析仪上进行产物半定量分析，以环氧化酶2 的相对吸光度值表示，环氧化酶2 的相对吸光度值=环氧化酶2 吸光度值/Cyclophin 吸光度值。
1.3 统计学方法
采用SPPS12.0 统计软件进行分析，计量资料采用t 检验，以x±s 表示，P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
服用麝香保心丸前和30 d 后，入选老年亚临床动脉粥样硬化患者外周血单核细胞环氧化酶2 mRNA 表达水平的比较：34 例治疗前为1.58±0.22，治疗后为0.76±0.14，治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
亚临床动脉粥样硬化也称动脉粥样硬化临床前期病变，是指已有动脉粥样硬化的客观证据，尚无重要的'动脉血管(如冠状动脉、脑动脉、肾动脉及外周动脉)严重粥样硬化狭窄导致明确的临床症状和证据的情况，这部分患者具有较高的心脑血管事件或其他严重血管事件的风险。对动脉粥样硬化临床前期病变积极早期干预有重要意义。本研究结果表明，老年亚临床动脉粥样硬化患者外周血单核细胞环氧化酶2 mRNA 表达明显较高(环氧化酶2 的相对吸光度值高达1.58±0.22)，支持环氧化酶2 参与动脉粥样硬化发展过程的观点。环氧化酶2 还与前列腺素产物增加等有关，前列腺素产物能增加血管渗透性，促进单核细胞黏附，诱导巨噬细胞化学趋化性，促进巨噬细胞迁移，刺激炎性细胞因子产生，激活基质金属蛋白酶，并使白细胞和血小板活化。麝香保心丸主要成分麝香人参提取物牛黄肉桂苏合香蟾酥冰片，具有芳香温通益气强心是心肌缺血引起的心绞痛胸闷及心肌梗死的安全有效的常用药，能明显降低动脉粥样硬化患者的病死率和心脑血管事件发生率。本研究结果表明，采用麝香保心丸对老年亚临床动脉粥样硬化患者外周血单核细胞体外干预，能显著降低老年亚临床动脉粥样硬化患者外周血单核细胞环氧化酶2 mRNA 表达[服用麝香保心丸30 d 后环氧化酶2 的相对吸光度值恢复至0.76±0.14 与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)]，说明麝香保心丸还具有抗炎等作用，更有利于防治老年亚临床动脉粥样硬化患者发生心肌缺血而致心绞痛、胸闷及心肌梗死等。
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