粉刺灵颗粒的定性定量分析

粉刺灵颗粒的定性定量分析

                                  作者：朱育凤 刘云 张倩 李政 常星洁

【摘要】本文通过对粉刺灵颗粒剂进行定性定量分析。得出结论：定性定量方法结果准确，重现性好，可用于粉刺灵颗粒剂的质量控制。
【关键词】粉刺灵颗粒  丹参酮ⅡA  薄层色谱法  高效液相色谱法
        粉刺灵颗粒剂主要由丹参、补骨脂、大黄、蒲公英、白花蛇舌草等组成，具有清热解毒，活血化瘀之功效，用于治疗痤疮。为了对其制剂进行更好地质量控制，我们采用薄层色谱法对粉刺灵颗粒中的丹参、补骨脂、大黄进行了定性控制，以丹参酮ⅡA为指标成分，应用高效液相色谱法对其进行定量分析，为提高粉刺灵颗粒质量控制标准提供了实验依据，现报道如下。
        1  仪器与试药
        1.1仪器  Agilent 1100高效液相色谱仪；Hypersil C18柱；BP211D 十万分之一电子分析天平）；939型全自动薄层制板器；WD-9413A凝胶成像分析仪；101-1A电热鼓风干燥箱；KQ-1000E医用超声波清洗器。
        1.2试药  粉刺灵颗粒剂由江苏省中医院制剂部提供；丹参酮ⅡA，丹参、补骨脂、大黄，对照品及对照药材均购于中国药品生物制品检定所。硅胶G。硅胶H。甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
        2  定性定量分析
        2.1薄层色谱鉴别
        2.1.1丹参的薄层色谱鉴别  取本品粉末5g，加乙醚25ml，超声20min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取丹参对照药材1g，同法制成丹参对照药材溶液。另取粉刺灵颗粒剂丹参阴性颗粒5g，同法制成粉刺灵颗粒丹参阴性对照溶液。再取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（2010版中国药典附录VI B）[1]试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。阴性无干扰。
        2.1.2补骨脂的薄层色谱鉴别[2]  取本品粉末5g，加乙酸乙酯20ml，超声15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取补骨脂对照药材1g，同法制成补骨脂对照药材溶液。另取粉刺灵颗粒剂补骨脂阴性颗粒5g，同法制成粉刺灵颗粒剂补骨脂阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010版中国药典附录VI B）[1]试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钠甲醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点。阴性无干扰。
        2.1.3大黄的薄层色谱鉴别  取本品粉末5g，加甲醇20ml，超声30min，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30min，立即冷却，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取大黄对照药材1g，同法制成大黄对照药材溶液。另取粉刺灵颗粒剂大黄阴性颗粒5g，同法制成粉刺灵颗粒剂大黄阴性对照溶液。照薄层色谱法（2010版中国药典附录VI B）[1]试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30℃～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变成红色。阴性无干扰。       2.2含量测定
        2.2.1色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(73:27) 为流动相；柱温为30℃；流速为1ml/min；检测波长为270nm。理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000。
        2.2.2对照品溶液的制备及线性关系考察  精密称取丹参酮ⅡA9.71mg，加甲醇溶解，定容至25ml,再吸取1ml,加甲醇定容至25ml，作为对照品贮备液。吸取5ml贮备液，加甲醇定容至10ml,分别吸取上述溶液3μl、6μl、10μl、15μl、20μl、25μl进样，测定峰面积，以丹参酮ⅡA含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y = 5488.99533 x-4.47379，r≈0.99997，丹参酮ⅡA在0.0233～0.1942μg范围内呈现良好的线性关系。
        2.2.3粉刺灵颗粒丹参酮ⅡA的含量测定  取本品约5g，精密称定，置棕色容量瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，进样10μl。
        2.2.4选择性试验  分别取对照品溶液、样品溶液、对照药材溶液、阴性溶液10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果显示，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液出现相同保留时间的色谱峰，丹参酮ⅡA和样品中其他组分色谱峰可达到基线分离，丹参酮ⅡA与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，阴性对照溶液在此保留位置上无色谱峰，表明阴性对照无干扰。
        2.2.5重复性试验  取同一批样品，按“2.2.3”制备6份供试品溶液，测定丹参酮ⅡA的含量，结果RSD≈0.04%(n=6)。
        2.2.6精密度试验  对照品溶液（浓度为15.536μg/ml）。连续进样6次，每次10μL，测得丹参酮ⅡA的峰面积。结果RSD≈0.23%(n=6)。
        2.2.7稳定性试验  取同一供试品溶液进样5次，测定丹参酮ⅡA的峰面积，结果RSD≈0.08%，表明此法稳定性良好（n=5）。
        2.2.8加样回收率试验  取已知含量的粉刺灵颗粒粉末5g，精密称定，分别加入丹参酮ⅡA对照品溶液（7.768μg/ml）1ml，按2.2.3项下方法制备，测定丹参酮ⅡA的含量，结果平均回收率为99.69%，RSD≈0.55%。
        3  小结与讨论
        本试验采用薄层色谱法对粉刺灵颗粒剂中的丹参、补骨脂和大黄进行定性鉴别，方法简便易行，重复性好。以丹参酮ⅡA为指标成分，采用高效液相色谱法对其进行定量分析，方法精密度高，稳定和重现性好，有效可行。 
参 考 文 献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.附录34.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:174.

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