三叶青的毒理学研究

时间:2017-05-07 论文范文 我要投稿
关键字:  毒理学 
  三叶青为葡萄科植物三叶崖爬滕Tetrastigma hems-leyanum Diels et Gilg的根 [1] ,又名金线吊葫芦、石老鼠。在浙江民间素有食用习俗,为评价其安全性。我们按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中“食品安全性毒理学评价试验”进行实验 [2] ,现将结果报告如下。     
  1 样品
   三叶青块根,切片,10倍水浸泡2h,每次1h,收集煎液。浓缩成1g生药/ml浓度,由杭州天惠医药科技有限公司提供。按民间食用习惯15g/人/d计算。 
  2 实验动物和检测条件     
  实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供,清洁级,医学实验动物合格证号为2001001,医学实验动物设施合格证号为2001001。实验用SD大鼠由浙江省实验动物中心提供,清洁级:医学实验动物合格证号为2001001,医学实验动物设施合格证号为2001001。实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供,执行标准GB14925-2001。检测环境条件:温度范围20℃~25℃,相对湿度范围60%~70%。实验动物试验前在动物房环境中适应3天,染毒前禁食过夜,不限制饮水。     
  3 实验方法     
  3.1 大鼠急性经口毒性试验    
  3.1.1 实验动物 选用健康、成熟、体重180~220g SD大鼠20只,雌雄各半。    
  3.1.2 剂量和给药方法 按最大耐受量试验方法将大鼠分为10.0g/kg,体重剂量组,每组20只,雌雄各半。大鼠灌胃前停食16h。连续观察14天,并记录动物中毒症状及死亡情况。    
  3.1.3 观察指标 染毒后,观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况,观察期限2周。
  3.2 小鼠急性经口毒性试验    
  3.2.1 实验动物 选用健康、成熟、休重18~22g ICR小鼠20只,雌雄各半。   
  3.2.2 剂量和给药方法 按最大耐受量试验方法将小鼠分为40.0g/kg体重剂量组,每组20只,雌雄各半。小鼠灌胃前停食16h。连续观察14天,并记录动物中毒症状及死亡情况。    
  3.2.3 观察指标 染毒后,观察小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况,观察期限两周。3.3 Ames试验    

  3.3.1 试验菌株 选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,共四株,即TA 97a 、TA 98 、TA 100 、TA 102 。由上海劳动卫生职业病研究所提供,经生物学鉴定合格后进行试验。
  3.3.2 剂量选择及阳性对照物 试验采用平板掺入法。样品以蒸馏水稀释至相应剂量。用TA 100 菌株的非代谢活化系统进行预试验,结果在剂量为5000μg/皿时未出现明显的增菌和抑菌现象,故正式试验时选择试验浓度为8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量组,外加阴性对照(蒸馏水,DMSO)和阳性对照组(9-氨基吖、2,7-二氨基芴、叠氮钠、2-乙酰氨基芴、丝裂霉素C、1,8-二羟基),每种菌株每个测试浓度设三皿平行,在加和不加S 9 条件下进行试验。   3.3.3 观察指标 直接计数培养基上各菌株的回菌落数。
  3.4 小鼠骨髓细胞微核试验    
  3.4.1 实验动物 实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供,体重25~28g。    
  3.4.2 剂量和给药方法 小鼠随机分5.0、10.0、20.0g/kg体重三个剂量组,一个阴性对照组(灌胃等容量蒸馏水)和一个阳性对照组(丝裂霉素C2.0mg/kg体重),每组10只。样品以灌胃方式给予,连续5天,每天1次,对照组也相同处理。于首次灌胃后第35天脱臼处死,每组随机选5只小鼠分别取两侧附睾,制成吸滤液直接涂片,自然干燥,甲醇固定,用1%伊红染色。    
  3.5 观察指标 高倍镜下观察精子形态并计数,每只小鼠计数完整精子1000条,计算精子畸形发生率(%)。 
  4 实验结果     
  4.1 大鼠急性经口毒性试验 实验期间,各组大鼠均未见明显症状,也无死亡。三叶青对雌雄大鼠经口LD50均大于100g/kg体重,属实际无毒。    
  4.2 小鼠急性经口毒性试验 实验期间,各组小鼠均未见明显症状,也无死亡。三叶青对雌雄大鼠经口LD50均大于40.0g/kg体重,属实际无毒。    
  4.3 Ames试验 各菌株回变菌落数见表1。表1 三叶青Ames平扳掺入试验结果(略)从实验结果可见,不同浓度受试物在加和不加S 9 条件下的回变菌落与阴性对照组相近似,而阳性对照回变菌落数均高于阴性对照回变菌落数2倍以上。说明三叶青 Ames试验检测结果为阴性。    
  4.4 小鼠骨髓细胞微核试验 三叶青对小鼠骨髓细胞微核率的影响见表2。表2 三叶青对小鼠骨髓细胞微核率的影响(略)注: * P<0.01(与阴性对照组比较)       
  用卡方检验统计,雌雄各剂量组与阴性对照组比较,微核千分率均无显著性差异,而阳性对照组微核率则显著高于阴性对照组,其差异有显著性(P<0.01)。说明三叶青 对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响。    
  4.5 小鼠精子畸形试验 三叶青对小鼠精子畸形发生率的影响见表3。表3 三叶青对小鼠精子畸形发生率的影响(略)注: * P<0.01(与阴性对照组比较)各剂量组与阴性对照组比较,小鼠精子畸形发生率均无显著性差异,而阳性对照组则明显高于阴性对照组,其差异有显著性意义(P<0.01)。说明三叶青对小鼠精子畸形发生率未见明显影响。     
  5 结论
   三叶青按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)    中“食品安全性毒理学评价试验:第一阶段大鼠经口急性毒性半数致死LD50),雌雄两性别均大于100g/kg体重:小鼠经口急性毒性半数致死量(LD50),雌雄两性别均大于40.0g/kg体重,按急性毒性分级标准判定,属实际无毒;第二阶段Ames试验结果为阴性,小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性,说明三叶青未显示有致突变性。
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