石蜡切片中BCL┐6抗原失活机制及修复
作者：张永清 黄高升日 赵一岭 王哲 闫庆国 郭英【关键词】 抗原修复
关键词: 抗原修复;免疫组织化学;BCL-6;淋巴组织增生
摘 要:目的 探讨石蜡切片中BCL-6抗原失活机制及修复的最佳方法. 方法 淋巴组织反应性增生11例石蜡切片分别用二乙胺四乙酸（EDTA）、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种与钙离子结合力不同的修复液，结合高压、微波和煮沸3种不同方法修复后，比较检出的BCL-6阳性率及强度. 结果 BCL-6阳性率由高至低依次为:EDTA0.73>柠檬酸0.45（P<0.01）>碳酸钠0.12（P<0.01），去离子水组无1例阳性.高压修复阳性率0.55>微波修复0.28和煮沸修复0.12（P<0.05）.不同修复液与高压结合修复检出BCL-6阳性率及强度:EDTA与柠檬酸阳性率分别为1，0.82（P>0.05），高于碳酸钠组（0.36）和去离子水组（0）（P<0.01）.EDTA组强阳性占0.82，显著高于其他各组（P<0.01）. 结论 EDTA结合高压是修复BCL-6抗原的理想方法，钙离子的参与可能是甲醛固定后BCL-6抗原失活的原因之一.
Keywords:antigen retrieval;immunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferation
Abstract:AIM To study the ideal method of retrieving the antigenic activity of BCL-6in paraffin sections and the possible mechanism of the antigen masking.METHODS Paraffin-embedded sections from11cases of lymphoid reac-tive hyperplasia were retrieved respectively by four retrieving solutions with different combining power with calcium:ED-TA，citrate，sodium carbonate（SC）and deionized water（DW），which with different retrieval methods:high pressure（HP），microwaving（MW）and stove boiling（SB），and the antigenic activities were detected by immunohistochemistry.RESULTS The positive percentage in sections retrieved by EDTA，citrate and SC were0.73，0.45and0.12respective-ly.The difference among the groups was significant（P<0.01）;the group of DW showed all negative.0.55of HP group was positive，which was higher than0.28of MW group and0.15of SB group（P<0.05and P<0.01）.The positive incidences of sections retrieved by HP with EDTA and HP with citrate were1and0.82respectively，which were higher than HP with SC（0.36）and HP with DW（0）（P<0.01）.0.82of HP with EDTA was intensive positive，the difference in positive intensity between HP with EDTA group and above mentioned groups was significant（P<0.01）.CONCLUSION HP with EDTA is the ideal method for retrieving antigenic activity of BCL-6by formalin-fixa-tive，suggesting that calcium may be involved in the antigen masking.
0 引言
BCL-6是位于染色体3q27原癌基因bcl-6编码的核内转录因子，由706个氨基酸组成，主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞［1］ .研究证实，bcl-6剔除鼠不能形成生发中心［2］ ，其基因调控区发生易位或（和）突变与B细胞淋巴瘤发生有关［3，4］ ，BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生［5，6］ .检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断［7］ .然而，40g・L-1 甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片，分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不同的修复液，结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果，探讨BCL-6抗原失活机制及修复的理想方法.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源及处理 2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例，反应性增生淋巴结标本4例.经40g・L-1 甲醛固定24h，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，切片置60℃烤箱过夜（切片用APES胶预处理）.
1.1.2 修复液及配制 1mmol・L-1 pH8.0ED-TA溶液:0.37g EDTA溶于1L蒸馏水，调pH值至8.0;10mmol・L-1 ，pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmol・L-1 pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等［9］ 及Morgan等［8］ 的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.
1.2 方法 高压修复参照Norton等［10］ 方法:1.5L修复液入压力锅中，加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上，浸入锅内修复液中，盖压力锅阀，加热至压力锅喷气后1min，停止加热，冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等［9］ 方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中，置医用微波炉内中低档加热10min，取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中，烧杯置于盛有自来水的铝锅内，电炉上加热，烧杯中温度达97℃后开始计时，15min后停止加热，冷至室温.