HPLC法测定双黄连颗粒中连翘苷的含量
【关键词】 双黄连；连翘苷；HPLC；药物含量测定双黄连颗粒是由金银花、黄芩、连翘制成的纯中药制剂，具有疏风解表、清热解毒的功效。其质量标准收载于《中国药典》2005年版一部，但标准中没有连翘的含量测定方法，不能有效的控制药品质量。方中连翘含量最大，具有清热解毒、消肿散结的作用，其有效成分为连翘苷。为有效控制药品质量，我们试用HPLC法测定双黄连颗粒中连翘苷的含量，取得良好效果。
1 仪器与试药
Agilent Technologies 1200 Series 高效液相色谱仪，Agilent Technologies G1314B VWD 检测器,色谱工作站：LabAlliance PC?2000分析之星，连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号0821?200104）；双黄连颗粒（批号20060612、20060816、20060824，哈药集团制药六厂）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱KromasilC18（4.6×200 mm，5 μm），流动相乙腈?水（25∶75），流速1?0 ml/min,检测波长277 nm，柱温30℃，进样量20 μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的连翘苷对照品5.65 mg，置于100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.2 样品溶液的制备：精密称取本品粉末3 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25 ml，称定质量，浸渍过夜，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用50％甲醇补足减少的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5 g，拌匀，加置中性氧化铝柱（100～120目，2 g，内径1 cm）上，用70％乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50％甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照液：取缺连翘的.处方药，按样品溶液制备方法制备阴性对照液。
2.3 线性关系考察 精密量取对照品储备溶液，1，2，4，6，8，10 ml分别置50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述方法进样20 μl，依法测定，外表法计算，以峰面积Y对浓度X(μg/ml)得线性回归方程：Y=6.145×104X-2.736×102,r＝0.9999。结果表明，连翘苷在0.18～1.25 μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度考察 取同一对照品溶液连续进样5次，每次20 μl，连翘苷峰面积均值为461740，其RSD=1.12%。
2.5 重复性试验 取同批号样品5份，按供试品制备方法制备，依法测定，结果连翘苷平均含量是0?84 mg/g，其RSD=1?35%。
2.6 稳定性试验 取同一样品溶液在0、2、4、6、8、10、12 h分别进样20 μl，依法测定，结果7次测定连翘苷峰面积均值为621758，RSD=0.81%。
2.7 加样回收试验 取已知含量的样品适量，精密称定，精密加入连翘苷对照品适量，按2.2.2样品溶液制备方法制备回收试验液，按2.8样品测定方法测定含量，结果见表1。表1 加样回收率试验结果样品含量
2.8 样品测定 取对照品溶液和样品溶液用0?45 μm微孔滤膜滤过，各进样20 μl，读取峰面积，按外表法计算含量，结果见表2。表2 样品中连翘苷的测定结果批号
3 讨论
用HPLC法测定连翘苷含量，试验比较了多种比例的流动相，以乙腈?水（25∶75）为优，保留时间适中。本试验采用中性氧化铝洗脱，可以除去杂质，70％乙醇可以完全洗脱连翘苷，并可以制成近无色的供试品溶液，这样有利于分离和保护色谱柱。该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于小儿感冒颗粒等的质量控制。
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