番木瓜eIF4E和eIFiso4E的克隆及其与PRSV-VPg互作研究
·番木瓜RNA提取 第33-34页
·试验器材的处理 第33-34页
·从组织中提取总RNA 第34页
·双链cDNA合成 第34-35页
·引物设计和RT-PCR反应 第35-36页
·PCR扩增程序 第36页
·PCR产物回收与鉴定 第36-39页
·PCR产物回收 第36-37页
·PCR回收产物与克隆载体pMD18-T Vector的连接 第37页
·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) 第37-38页
·连接产物转化感受态细胞 第38页
·重组质粒的菌液PCR鉴定 第38页
·序列鉴定与分析 第38-39页
·酵母双杂交鉴定PRSV-VPg与番木瓜eIF4E和eIFiso4E的互作 第39-47页
·酵母诱饵表达载体pBD-GAL4 Cam-VPg的构建及鉴定 第39-41页
·VPg基因加入相应的酶切位点 第39页
·重组质粒的提取(采用TIANGEN小提中量试剂盒) 第39-40页
·重组质粒的酶切鉴定 第40页
·诱饵载体pBD-GAL4 Cam的制备 第40页
·VPg基因与诱饵载体pBD-GALA-Cam的连接 第40-41页
·连接产物的转化及鉴定 第41页
·酵母激活域表达载体pAD-GAL4-2.1-eIF4E/eIFiso4E的构建及鉴定 第41-42页
·番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因加入相应的酶切位点 第41-42页
·重组质粒的提取 第42页
·重组质粒的酶切鉴定 第42页
·激活域载体pAD-GAL4-2.1的制备 第42页
·番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因与激活域载体pAD-GAL4-Cam的连接 第42页
·连接产物的转化及鉴定 第42页
·诱饵质粒的转化及毒性与自激活检测 第42-44页
·酵母菌株表型鉴定及酵母感受态细胞的制备 第43页
·酵母菌株表型鉴定 第43页
·酵母感受态细胞的制备 第43页
·分别转化重组子pBD-GAL4 Cam-VPg和空载体pBD-GAL4 Cam(对照)入酵母YRG-2感受态 第43-44页
·诱饵表达质粒的毒性检测 第44页
·诱饵质粒表达的融合蛋白自激活检测 第44页
·激活域载体转化酵母YRG-2及毒性与自激活检测 第44-45页
·酵母感受态细胞的制备 第44-45页
·分别转化重组子pAD-GAL4-2.1-eIF4E/eIFiso4E、空载体pAD-GAL4-2.1(阴性对照)及pGAL4(阳性对照)入酵母YRG-2感受态 第45页
·激活域表达质粒的'毒性检测 第45页
·激活域表达质粒自激活检测 第45页
·酵母双杂交 第45-46页
·含有诱饵质粒的酵母感受态细胞的制备 第45页
·转化激活域重组子入含有诱饵质粒的酵母感受态细胞 第45-46页
·酵母克隆的初步鉴定 第46-47页
·β-半乳糖苷酶影印法筛选阳性克隆 第46页
·阳性酵母质粒的提取、回转大肠杆菌验证 第46-47页
·阳性克隆的测序 第47页