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链霉菌噬菌体ΦC31位点特异性整合酶的结构与功能初步探讨
论文摘要: ΦC31位（略）酶由于能介导携带有attB序列的目的基因位点特异性整合到哺乳动物细胞基因组中,因而该系统已成为基因操作及基因治疗的强有（略）,该整合酶在哺乳动物细胞上介导整合的位点特异性和整合效率仍需进一步提高.而解析ΦC31位点特异性整合酶结构与功能关系是解决上述问题的基础和关键.为此,本研究利用（略）ΦC31位点特异性整合酶结构进行预测,结合分子生物学技术对其结构与功能关系进行初步探讨,其结果如下: 1、利用生物信息学对包含ΦC31位点特异性整合酶在内的丝氨酸位点特异性重组酶家族30个成员进行同源比对,结果显示:aa1—120为催化结构域,其在整个家族里是保守的；aa291-359含有许多带电残基(22aa)和极性残基(10aa),预测为蛋白多聚化相关区域,4个保守的Cys残基位于aa353—405,该区域可（略）合相关区域,aa416—504为Leu富含区,包含了14个Leu,aa457—527预测为α螺旋结构. 2、依据ΦC31位点特异性整合酶结构预（略）T22b-ΦC311-528等八个截断突变体质粒.这些质粒分别与ΦC31报告质粒共转在体内进...
TheΦC31 site-specific integrase can promote gen（omitted）ration of plasmids carrying attB into native mammalian sequences. Consequently it has become a powerful to（omitted）e manipulation and gene therapy. However, the specificity and efficiency of integration in mammals need to be （omitted）proved. Analysis the relationship between structure and f（omitted） theΦC31 integrase is the basis and key for solving above problems. To this end, this stu（omitted）informatics to forecast the structure of theΦC3...
目录:缩写词 第5-6页
中文摘要 第6-7页
英文摘要 第7-8页
前言 第9-14页
材料和方法 第14-30页
·.材料与试剂 第14-20页
·.方法 第20-30页
结果 第30-44页
·.ΦC31整合酶基因同源分析及结构预测 第30-32页
·.ΦC31整合酶及其截断突变体表达质粒构建 第32页
·.ΦC31整合酶及其截断体体内活性检测 第32-34页
·.ΦC31整合酶及其截断体的表达与纯化 第34-36页
·.ΦC31整合酶及其截断体蛋白DNA结合功能域的检测 第36-40页
·.ΦC31整合酶及其截断体蛋白构象的远紫外CD谱测定 第40-44页
讨论 第44-47页
小结 第47-48页
参考文献 第48-52页
综述 第52-60页
参考文献 第57-60页
致谢 第60-61页
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