分析水溶性对敌百虫的影响农科论文
1离体皮肤的制备
用丁香酚麻醉,剪取鱼皮,去除皮肤外侧鳞片及内侧肌肉等附着物,用异丙醇擦除皮肤上内侧多余脂肪,经生理盐水洗净后将鱼皮置于-20℃条件下保存[4],备用。释放液和接收液的配制准确称取0.5g敌百虫原药,溶解于100mL蒸馏水中,用蒸馏水定容至1000mL,从中取1mL稀释至1000mL,即得0.5mg/L的敌百虫溶液。向该溶液中分别按要求准确加入水溶性氮酮、丙二醇和薄荷醇,配制成含不同浓度各促渗剂的敌百虫药物释放液。测定发现,试验鱼体表肌肉浸出液的pH值与蒸馏水相近,故采用生理盐水作为体外经皮渗透试验的接收液。体外经皮渗透试验将杂交鳢皮固定于透皮实验仪的Franz扩散池中,皮外侧朝向给药池,内侧朝向接收池(如图1)。向给药池和接收池中分别加入1.3.2节配制好的释放液和接收液。试验组给药池按要求分批次加入含不同促渗剂和敌百虫的释放液,对照组释放液中仅含敌百虫,接收池溶液及其他条件均一致。分别在2、3、4、6、8、10和12h于接收池中取样5mL,检测敌百虫的浓度,每次取样后补足等量的接收液。试验水浴温度设定为25℃,磁力搅拌速率为200r/min。为模拟实际施药环境,每次取样后均更换给药池的释放液(12h取样点除外)。数据处理根据气相色谱测得的各时间段所采集接收液中敌百虫的浓度,计算得到单位面积的累积渗透量(Q,μg/cm2)[5],计算公式见式。
2结果与分析
2.1标准曲线
以色谱峰面积为纵坐标(y)、进样质量浓度为横坐标(x)作标准曲线,得标准曲线方程为y=5318.9x-43.216,相关系数r=0.9998,表明在0.010~1.000mg/L范围内,敌百虫进样质量浓度与色谱峰面积间具有良好的线性关系。
2.2方法的回收率及检出限
结果表明,当样品中敌百虫的添加水平为0.50和0.25mg/L时,回收率分别为95.86%和92.93%,相对标准偏差(RSD)分别为3.31%和4.09%。计算得方法的检出限(LOD)为0.006mg/L。
2.3样品杂质峰分析
试验样品中敌百虫含量测定的气相色谱图见图3。除在3.486min附近有主峰外,在9.223min左右出现了小的杂质峰。鉴于农业部783号公告—3—2006中[6]未提及色谱分析时敌百虫受热裂解成敌敌畏的问题,因此该杂质峰可能是由于敌百虫原药(90%)中所含杂质敌敌畏等成分造成的。
2.4体外经皮渗透试验结果
2.4.1不同种类及不同浓度促渗剂作用下敌百虫的经皮累积渗透量促渗剂对敌百虫经杂交鳢皮单位面积累积渗透量(Q)的影响结果(表1)表明:2种浓度的丙二醇在各时间段内均对敌百虫的渗透有明显促进作用,与对照组相比差异极显着(P<0.01),且Q值与其浓度呈正相关;体积分数为6×10-7的水溶性氮酮在10h及12h时对敌百虫的渗透有明显促进作用,与对照组相比差异显着(P<0.05),而体积分数为1×10-2的水溶性氮酮却表现出一定的拮抗作用,在试验2h时与对照组相比其Q值明显偏低且差异显着(P<0.05);2种浓度薄荷醇对敌百虫的渗透均无明显影响。
2.4.2不同种类及不同浓度促渗剂作用下敌百虫的经皮吸收速率及增渗比根据表2中吸收速率(Js)及增渗比(ER)可知,体积分数为6×10-7的水溶性氮酮以及6×10-7和1×10-2的丙二醇对敌百虫的经皮渗透均有促进作用,其作用由强到弱依次为1×10-2的丙二醇>6×10-7的丙二醇>6×10-7的水溶性氮酮;而体积分数为1×10-2的水溶性氮酮则表现为一定的拮抗作用;1和2mg/L的薄荷醇对敌百虫的经皮渗透无明显影响。
3讨论
皮肤的屏障作用易导致药物难以到达病原寄生部位或达不到治疗浓度,因此促渗剂作为一种能促进药物渗透作用的成分已越来越受到医学工作者的重视[7–9]。国内外对人、畜用药物的促渗剂已有一些研究[7–14],而应用于水产药物的促渗剂却鲜有报道。研究表明,鱼类的皮肤与其他动物相似,也是由表皮和真皮层组成,这使得将医药及兽药促渗剂应用于水产用药物成为可能[10]。Másson等[4]曾以环糊精为促渗剂,利用Franz扩散法测定了不同种鱼(鲶鱼、斑点鲶鱼、比目鱼、鲽鱼)、老鼠和蛇的皮肤对质量分数为1%的盐酸可的松的渗透性,结果表明,药物经鱼皮肤的'渗透效果比老鼠皮强100倍,比蛇皮强10000倍。由此推测,促渗剂对水产动物皮肤渗透作用的促进效果可能更好。本研究以杂交鳢皮作为经皮渗透试验用皮,通过在敌百虫中添加不同浓度的水溶性氮酮、丙二醇和薄荷醇来增强药物的经皮渗透作用。促渗剂试验浓度是结合文献报道中的常规有效浓度、敌百虫在水产中的用药浓度及考虑实际应用中的生产成本后确定的,其中高浓度为文献报道中人畜药物的常用浓度。薄荷醇作为促渗剂一般需经有机溶剂溶解后再添加于药物中使用,但由于其在水中微溶,不宜将其在有机溶剂中的常用浓度应用于本研究(水体环境)中。在无相关文献可参照的情况下,考虑到生产成本,故以接近敌百虫的用药浓度作为促渗剂的低试验浓度[8,11]。结果表明:在供试高、低2种浓度下,丙二醇对敌百虫的增渗比分别为1.59和1.63,促渗作用最佳;水溶性氮酮在低浓度下具有一定的促渗作用,增渗比为1.12,而在高浓度下却表现出一定的拮抗作用,这与胡兆农等[11]研究发现100mg/L的氮酮对30%敌百虫乳油的杀虫效果有拮抗作用,以及彭松[12]关于低浓度氮酮能够增强药物的渗透作用,而高浓度下反而减弱渗透作用的报道类似;薄荷醇在2种试验浓度下均无明显的促渗作用,可能是由于其在水中微溶,本试验中添加的浓度较低,未达到有效促渗浓度的缘故。促渗剂的作用效果与其作用机制相关。丙二醇是一种广泛应用的促渗剂,通常认为其能够增加药物在角质层中的溶解度,提高药物对皮肤的渗透性[13]。但由于鱼皮表层细胞并没有角质层,因此其可促进敌百虫经鱼皮渗透的作用机制还有待研究。氮酮是目前最常用的一类促渗剂,属于人工合成物质,水溶性氮酮是由氮酮开发而来的水溶性制剂产品,其作用机制可能是通过增强脂质双分子层的流动性来促进药物透过表皮细胞的[14]。但本研究中加入高浓度氮酮后敌百虫的经皮渗透作用反而降低,其原因也有待进一步研究。本研究表明,将促渗剂应用于水产动物给药中是可行的,且其不仅在常规使用浓度时可表现出促渗作用,在低浓度(接近水产养殖中敌百虫的使用浓度)时同样具有促渗效果,这一特征为将促渗剂应用于其他高毒、高残留的水产药物提供了理论依据。但本研究未选取促渗剂的其他浓度进行试验,因此下一步研究需完善相关浓度试验,筛选最优促渗剂浓度。利用促渗剂配伍常规水产用药物制成高渗透性药剂,有望提高药物的疗效及利用率,节省用量,从而降低养殖成本和环境污染。
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